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◆ 免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)

服務內容

1. 溫和條件下進行蛋白抽提,BCA定量,調整蛋白濃度

2. 樣品預處理:用Protein A/G Sepharose孵育

3. 樣品與IP抗體進行孵育

4. 洗滌Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex,并對免疫復合物進行變性處理

5. 沉淀產物SDS-PAGE或者WB鑒定(目前暫不提供別的鑒定)

6. Western blot檢測

1) 電泳:聚丙烯酰胺凝膠SDS-PAGE分離蛋白樣品

2) 濕法。BLOTINGTank Transfer

3) 雜交:用抗體鑒定膜上的特定蛋白INCUBATION: Antibody

4) 化學發光檢測(ECL,膠片曝光,TotalLab Quant軟件讀取IOD值(可選)

樣品要求(樣品處理及保存見附件)

1. 細胞>1×107;組織>30mg;細菌濕重50mg;植物100mg;血清50ul

2. 樣品蛋白濃度>1mg/ml,蛋白量500ug/樣品

收費標準

服務項目

收費標準

實驗周期

免疫沉淀

7500/基因

3-4

免疫沉淀+可曝光marker

7800/基因

3-4

ImageQuant TL讀取條帶IOD值及計算

 !

客戶提供材料

1、 新鮮或正確保存的樣品

2、 目的蛋白一抗

3、 陽性對照樣品(盡量提供)

4、 相關文獻(可選)

提交給客戶結果

1、預實驗曝光結果(膠片及掃描圖),預實驗采取2個一抗稀釋度

2、正式實驗曝光結果(膠片及掃描圖)

3、完整實驗報告

4、IOD值分析報告(可選)

5、抗體是否可以適用于IP是進行ChIP的前提

服務說明

1. 待檢測樣品可以是待檢測蛋白樣品,也可以是細胞、組織等其他樣品;

2. 免疫沉淀用抗體;

3. 檢測用抗體;

4. 特異性二抗由天德悅(北京)生物科技有限責任公司提供;

5. IP檢測可以不進行,但是不能保證后續實驗的結果。

對照設置

1、 空白:無抗體,只有protein A/G

2、 陰性對照:無蛋白,有抗體及protein A/G

3、 陰性對照:未轉染細胞或者基因敲除樣品

4、 無關空白抗體

5、蛋白裂解液上清:Input

 

 

 

 

◆ 染色質免疫共沉淀Chromatin Immunoprecipitation,ChIP

服務內容

1. 樣品甲醛交聯固定、終止、收集樣品、裂解樣品

2. 超聲或者酶解處理樣品DNA成片段,瓊脂糖電泳檢測

3. 樣品預處理:用Protein A/G Sepharose孵育

4. 樣品與IP抗體進行孵育

5. 洗滌Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex,并對免疫復合物進行變性處理,提取DNA樣品

6. 檢測

1) 實時熒光定量PCR檢測(最常用,免費檢測)

2) DNA芯片檢測(需要聯系測試廠家,需要另付費。詢價)

3) DNA產物測序(需要聯系測試廠家,需要另付費。詢價)

收費標準

服務項目

收費標準

實驗周期

ChIP

15000/基因

3-4

實時熒光定量RT-PCR

免費

2

 

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