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◆ 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)

一、服務內容

1、溫和條件下進行蛋白抽提,BCA定量,調整蛋白濃度

2、樣品預處理:用Protein A/G Sepharose孵育

3、樣品與IP抗體進行孵育

4、洗滌Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex,并對免疫復合物進行變性處理

5、沉淀產物SDSPAGE或者WB鑒定(目前暫無其它鑒定)

6、Western blot檢測

1) 電泳:聚丙烯酰胺凝膠SDS-PAGE分離蛋白樣品

2) 濕法。BLOTINGTank Transfer

3) 雜交:用抗體鑒定膜上的特定蛋白INCUBATION: Antibody

4) 化學發光檢測(ECL,膠片曝光,TotalLab Quant軟件讀取IOD值(可選)

7、預實驗及正式實驗服務

二、樣品要求(樣品處理及保存見附件)

1、細胞>1×107;組織>100mg;細菌濕重50mg;植物100mg;血清50ul

2、樣品蛋白濃度>1mg/ml,蛋白量200ug/樣品

三、收費標準

服務項目

收費標準

實驗周期

免疫共沉淀

8300/基因

3-4

免疫共沉淀+可曝光marker

8600/基因

3-4

ImageQuant TL讀取條帶IOD值及計算

 !

四、客戶提供材料

1、新鮮或正確保存的樣品

2、目的蛋白一抗

3、陽性對照樣品(盡量提供)

4、相關文獻(可選)

五、提交給客戶結果

1、預實驗曝光結果(膠片及掃描圖),預實驗采取2個一抗稀釋度

2、正式實驗曝光結果(膠片及掃描圖)

3、完整實驗報告

4、IOD值分析報告(可選)

六、服務說明

1、待檢測樣品可以是待檢測蛋白樣品,也可以是細胞、組織等其他樣品;

2、免疫沉淀用抗體;

3、檢測用抗體;

4、特異性二抗由北京賽諾博生物技術中心提供。

七、對照設置

1、空白:無抗體,只有protein A/G

2、陰性對照:無蛋白,有抗體及protein A/G

3、陰性對照:未轉染細胞或者基因敲除樣品

4、無關空白抗體

5、蛋白裂解液上清:Input

 

應用實例

 

 


 

 

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